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仪器设备标准操作规程

气质联用仪操作规程
2018-01-08 10:27   审核人:

岛津GCMS-QP2010 Ultra操作规程

制订目的:建立岛津GCMS-QP2010 Ultra操作规程,保证设备的正常运行。

编制人 杨义科 审核人 时秋娜

责任人 李磊 编制时间2013年8月

1.简述

气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术的简称。是将气相色谱仪器(GC)与质谱仪(MS)通过适当接口(interface)相结合,借助计算机技术,进行联用分析的技术。GC-MS是最成熟的两谱联用技术,被广泛应用于复杂组分的分离与鉴定,其具有GC的高分辨率和MS的高灵敏度,是生物样品中药物与代谢物定性定量的有效工具。

2.工作原理

对于气化或经衍生等手段处理后易于气化的有机物,经气相色谱将各组分分离后,进行定性、定量。适用于检测分子质量范围:1-800,最低检测限为10-8--10-12g。

3.操作步骤

3.1查看He气体钢瓶的分压,保持0.5 MPa -0.9MPa

3.2检查AOC-20i AUTO INJECTOR中的洗液瓶中洗液是否足够,不够则添加适量的洗液,废液瓶中的废液是否过多,多则及时把废液倒掉。

3.3按顺序把GC电源、MS电源、电脑电源、显示器电源打开。

3.4双击桌面的GCMS Real Time Analysis图标,连线过程中会出现一短、一长两声鸣响,表示连接GC、MS成功。

3.5单击系统匹配辅助栏按钮System Configuration进入设置菜单后,单击左栏的Available Modules中当前所需要用到的部件添加到右栏的Modules Used for Analysis中,双击右栏的GC-2010,在General中的Max Temp.of Oven设置烤箱最高温度。双击右栏的Analytical Line#1任一个子菜单,可进入Modules of Analytical Line#1菜单,在AOC-20i+s菜单中设置样品瓶的体积Vial Capacity和注射针的体积Syringe Capacity。单击SPL1中菜单的Injection Port Maintenance(SPL1),设置GC垫片的使用次数(Septum Used Counts)和衬管石英棉的使用次数(Insert Used Counts),在SPL1中的Heater栏。设定注射口最高温度,在Flow栏设定Primary Pressure压力。在Column菜单中的Registered Columns设定当前所用柱子的名字、膜厚、长度、内径、最大流失温度。在MS菜单中设定Interface的最高温度,选择离子源的类型和保护温度。最后按System Configuration菜单的Set键保存信息。

3.6如果需要更换GC垫片(Septum)和石英棉(Glass Insert),更换后单击GCMS Real Time Analysi主画面的右侧的Detial按钮进入Monitor Settings的Consumable子菜单,单击Reset Consumables按钮,进入Reset Consumables菜单,单击Clear按钮 把GC垫片(Septum)和石英棉(Glass Insert)使用次数归零。

3.7进入GCMS Real Time Analysi主画面后,单击仪器状态监控窗口底部的Detial按钮进入Monitor Settings的Line1子菜单把SPL1的Temperature(进样口温度)、Column的Temperature(柱温)、MS的Ion Source(离子源温度)和Interface(接口温度)设为170-200℃,如果MS的Ion Source显示为白色,表示当前不加热,则需单击辅助栏的Vacuum Control按钮,进入Vacuum Contro菜单后,再单击Advanced按钮,把Vacuum System中的Ion Source Heater通过单击ON打开,开始加热。温度达到设定值后,单击辅助栏的Tuning按钮,再单击Peak Monitor View,选择Monitor Group中的Water、Air,然后单击打开灯丝按钮,查看系统是否漏气,正常的比例是,水峰比氮气峰高,氮气峰比氧气峰高。如果氮气峰比水峰高,则再单击灯丝按钮先把灯丝关掉,选择Monitor Group中的检漏2,单击参比气体,待5秒后,再单击灯丝按钮,如果m/z为69的峰的比例比氮气峰高,说明系统不是真实存在漏气,如果否,说明系统真实存在漏气,应该解决漏气问题后,才往后面操作。

3.8如果更换了GC垫片或石英丝、毛细管柱,清洗了离子源,卸、抽真空,进行了比较大的仪器变动(正常情况下,每周调机一次),则需要重新调机,单击辅助栏的Tuning按钮,再单击Auto Tuning Condition,把Target Condition参数设置好(如果是测PBBS、PBDES,FWHM of Peak Profile参数设为0.7、Target Mass参数设为614),再单击Start Auto Tuning按钮,则仪器开始自动调机,调机结束后,自动进入Tuning Result View菜单。

3.9单击辅助栏的Data Acquistion,再点击菜单栏中File子菜单Save Method File As建立PBBS、PBDES的SCAN方法(要建立Sampler、GC、MS三种参数)。根据待测品为标样或未知样品的物理性质来设定Sampler栏的参数,一般来讲,如果待测品为标样时,#of Rinses with Solvent(Pre-run)(进样前,用溶剂清洗进样针的次数)设为0。其它参数建议用默认值,如果要选择不同溶剂来清洗进样针,可单击Advanced按钮,进入菜单后,在Solvent Selection栏,选择所需要模式。(自动进样架一共可以放3个溶剂瓶和3个废液瓶,从右到左为A、B、C、3个溶剂瓶,溶剂瓶之间放废液瓶。注意Syringe Suction Position默认值为0,表示为进样针打到离样品瓶底的3mm处,最底值设为-2mm表示为进样针打到离样品瓶底的1mm处。)GC栏的Injection TemP.(进样口温度)设为280℃,使用不分流衬管,Injection Mode(进样方式)设为Splitless,Sampling Time(进样时间)设为1min,Split Ratio(分流比)设为20,单击Detail of Injection Port (进样口详情)按钮,进入Injection Unit Advanced菜单,把High Pressure Injection栏打勾,Pressure参数设为200KPa,Time参数设为1 min,按OK键保存。柱温的设定,从110℃开始,保留2 min,以40℃/ min,升到250℃后,再以10℃/ min,升到300℃,保留2 min,最后以40℃/ min,升到325℃,保留5 min。GC的Total Program Time为18.13 min。

注意:使用不分流进样时,GC进样口所用的衬管要更换为不分流石英衬管。

MS栏的Ion Source Temp设为250℃,Interface Temp设为290℃,Solvent Cut Time(溶剂切割时间)设为1.5 min。MS的Start Time(min)设为2.0 min,Start( m/z)设为100,End( m/z)设为1000。

  1. 保存参数设定,覆盖在9建立的扩展名为SCAN的方法文件中。

    3.10单击辅助栏的Data Acquistion,进入子菜单,再单击Sample Login,在Acquisition Information栏建立好样品名字、样品ID号、数据名字(单击Data File项的右侧文件夹按钮,选择数据文件存放路径和建立名字),在Sampler栏,建立好样品瓶的位置号、注射体积,单击Tuning File项的右侧文件夹按钮,选择需要的调机文件。单击确定按钮保存。单击子菜单Standy,软件把已经建立好的Sampler、GC、MS三种参数传输到仪器。设定的条件达到后,仪器状态监控窗口顶部,GC和MS栏,显示为Ready,底色为蓝色。同时,子菜单的Start键由灰色转亮,单击Start键,仪器开始收集数据。

    注意:SCAN的方法,目的是为找出各种化合物的特征碎片离子,所以一般取浓度较高的混标溶液,使SCAN方法收集的数据感度强,MS峰明显,容易辨认出特征碎片离子。

    3.11收集完SCAN数据后,双击GCMS Postrun Analysis,后处理图标。先单击Quantitative按钮,后单击左侧Data Explorer数据浏览器的Project in栏的Select Project按钮,进入Project(Folder) Selection菜单,单击SCAN数据所存放的文件夹,然后关掉该窗口。在所选的文件夹底下的空白栏,File Name项中双击相应的SCAN数据,点击右下角的化合物ID表的Param,s(参数标签),再点击顶上的Edit键,开始创建目标化合物表。在TIC总离子色谱图中,用鼠标左键局部放大要定义的色谱峰,如果需要返回原始比例,可以点击鼠标右键的Undo Zoom,或者Initialize Zoom,需要显示基线时候,可以点击鼠标右键的Base Shift。调好色谱峰的放大比例后,单击工具栏的Average Specturm按钮,按住鼠标左键,从色谱峰的起点拉到结束点,在质谱图中显示出,色谱峰出峰这时间内的平均质谱图,单击工具栏的Subtract Specturm,然后双击色谱峰的起点或结束点,以扣除单点质谱图背景值,也可单击工具栏的Average& Subtract Specturm,扣除一段时间的质谱背景值。单击化合物ID表中,每行ID号,然后选择右键的Set Compound Information,出现Set Compound Information菜单,把该菜单移到质谱图上方,以便观测质谱图,选者合适的参数。Type项选择该化合物的类型,如果使用外标法做校准曲线,所有化合物选Target(目标化合物)。如果选内标法做标准曲线,除了内标化合物选Reference(内标)外,其他化合物选Target(目标化合物)。点击Compound Name底下的Set name建立该色谱峰的名字,右侧的Target Ion(目标离子)选择MC(质量数色谱图)校准。Decimal for mass(质量数小数点后精确位数),选2 decimals。选择合适的Target Ion(目标离子)和Ref.Ion(参考离子)

    3.12定量参数保存后,化合物ID表的Param,s(参数标签),会出现相应的不同浓度点数,填上每个浓度点数所对应的化合物的浓度,及单位,最后点击View按钮查看是否有参数漏掉忘记设定,确定没有参数漏掉设定,点击菜单栏中File子菜单Save Method File As,建立PBBS、PBDES的SIM方法。

    3.13双击桌面的GCMS Real Time Analysis图标,进入实时分析工作站,点击菜单栏中File子菜单Open Method File打开13所建立的SIM方法,后点击辅助栏的Data Acquisition,再点击菜单栏中Method子菜单Creation of Automatic SIM(Scan/SIM) Table [COAST],进入该菜单后,开始设置SIM表。

    3.14在实时分析工作站,使用14.5所建立的SIM方法,开始从低浓度到高浓度收集各个混标的SIM数据,点击辅助栏的Batch Processsing(批处理程序),右件键点击ID表的某一行,用Add Row(增加)或Delete Row(删除)、Insert Row(插入)键,改变所要进行测试的数目。

    3.15收集完SIM数据后,单击后处理辅助栏的Quantitative按钮,后双击左侧Data Explorer数据浏览器数据文件目录(单击工具栏的Data Explorer 按钮,可以打开Data Explorer数据浏览器),打开要积分来建立标准曲线的数据。

    3.16点击后处理辅助栏的Calibration Curve按钮,Data Explorer数据浏览器底下选择方法文件目录,选择已经保存有目标化合物表和SIM表的方法文件,双击左键打开该方法保存的目标化合物ID表,在数据浏览器的右侧下方,Datal Files栏目显示该方法不同浓度点。

    3.17实时分析中使用完整的SIM方法,对未知样品进行测试,可以选择单针或批处理进样。

    3.18在后处理点击Quantitative按钮,单击左侧Data Explorer数据浏览器数据目录中需要进行定性定量的未知样品数据,再点击辅助栏的Load Method,选择完整的SIM方法文件,会出现出现GCMS Postrun Analysis菜单内容为“[1045] Method information loaded successfully”点击确定按钮。如果要对未知样品进行定性,有2个判定条件,同时满足以下两个条件才能判定未知样品存在目标化合物。在未知样品的MIC(多离子色谱图)的出峰时间和目标化合物ID表的Param,s(参数标签)所定义的目标化合物出峰时间相差不大于0.05min。

    备注:鼠标在MIC(多离子色谱图)移动时候,图上方会提示该点出峰时间。单击目标化合物ID表中的某个化合物所出现的单个MC图(质量数色谱图)中,该目标化合物的Target Ion(目标离子)和Ref.Ion(参考离子)必须同时出现。

    3.19单击左侧Data Explorer数据浏览器数据文件目录中需要进行报告打印的数据,按住左键拖放到报告模板中,点击工具栏Print Preview(打印预览),检查打印内容和效果。点击工具栏Print,报告被输出到打印机准备打印。

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